肉的宰后嫩化主要是归因于肌原植物人造黏胶纤维构造的损害，肌原植物人造黏胶纤维构造是由内源性淀粉酶质电离酶溶解肌原植物人造黏胶纤维和生殖細胞膜骨架淀粉酶质会造成的。与几百年来一直都在是留意主角的钙淀粉酶质酶各种，胱天淀粉酶质酶（caspases）最近几天为感求知欲话语题。胱天淀粉酶质酶在生殖細胞膜凋亡的履行时期起着至关极其重要的用途，在这当中caspase-3在生前淀粉酶质电离中的用途是各种面和繁复的，故而不错进那步理论论述。S-亚硝基化按照控制钙施放、激光能量分解、淀粉酶质质溶解和生殖細胞膜凋亡来控制肉质地，包扩嫩度和持水专业能力。事前理论论述显示S-亚硝基化能否调低依靠线粒体的caspase-3级联症状，这或者是手臂肌肉生殖細胞膜凋亡和牛肉片产品品质变化无常的原由。caspase-3的理论论述关键是其与生殖細胞膜凋亡的联系，那么，很小有理论论述研究S-亚硝基化控制caspase-3的制度。

2024年9月由扬州农产品加工高校张万刚讲师管理团队在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱生物学为该研究提供了亚硝基化表达组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

2英文主题词：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

中文核心期刊：Journal of Agricultural and Food Chemistry

202四年影响力细胞：5.7

发过的时间：2024年9月

大家计量单位：南京农业大学

探讨物料：蛋白

拜谱保证方法：亚硝基化修饰组学

高技术自驾路线：

一、研究探讨没想到

01.Caspase-3活性氧

当前尚不清析NO对caspase-3的克拍摄用需不需要归因于NO介导的S-亚硝基化，各种密度梯度方向的GSNO算作外源性NO销售，以引发caspase-3的体内S-亚硝基化。后果表面，与还没有GSNO的组相对来说，100、200和400μM GSNO组的caspase-3吸附性取得大大减少（图1），与原本简报一样。GSNO除理大大减少caspase-3吸附性的潜在性的原因分析仍亟待揭示。

图1 不同于浓度值的GSNO解决对caspase-3活性酶的引响

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化层次

探讨Caspase-3的亚硝基化层次，以体现了GSNO对Caspase-3的生理反应性。经GSNO处理后，检查测量到caspase-3蛋白酶S-亚硝基化強度上升（图2）。一些毕竟揭示，外源性GSNO塑造培养可出色诱导性caspase-3的身体S-亚硝基化。惹人惊艳的是，在无GSNO的存在的比组中检查测量到个不大的S-亚硝基化带，这揭示caspase-3很有可能发生内源性的S-亚硝基化。还有，本探讨中caspase-3的S-亚硝基化层次较高，而caspase-3的几丁质酶降，这与以前的探讨一样。那么，caspase-3的特情人S-亚硝基化表达位点尚不明确，还必须进的一步的探求。

图2 GSNO加工处理对caspase-3S-亚硝基化平行的影响力

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化修饰语组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的编码字段。绿色标注的编码字段表现S-亚硝基化肽，紫色标注的C表现S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱分析

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3挥发结血清

结蛋清是一款注重的血细胞系骨架蛋清，在保护肌血细胞系架构设计的架构设计完美性和缩紧性方向起着注重目的，研究分析S-亚硝基化caspase-3对结蛋清吸附的敏理性性拥有注重重大意义。与Std（未用胱天蛋清酶-3和GSNO孵育的一开始肌化学人造纤维蛋清）组相比之下，0 μM GSNO组（肌原化学人造纤维和caspase-3的孵育，无GSNO）的完美结蛋清占比正相关削减，提升caspase-3对结蛋清拥有不确定性的蛋清淀粉酶质水解业务能力。在GSNO孵育后，完美结蛋清的占比非常明显添加（P < 0.05）。还有，当GSNO浓度值变高时，完美结蛋清的占比定期上涨（P < 0.05）（图5）。这类出现 取决于，SNO体现的caspase-3以水平方向根据的方法克制结蛋清的吸附。

图5.S-亚硝基化caspase-3生物降解结核蛋白

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3降解塑料肌钙蛋白酶-T

肌钙核淀粉酶酶酶-T (TnT)是原肌球核淀粉酶酶酶调承担责任全身肌肉缩小的丝条的都要肌原玻璃黏胶纤维棉核淀粉酶酶酶。TnT的化学可生物吸附优点是的检查测量到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化必备条件下，caspase-3对TnT的化学可生物吸附条件如图是6一样，与Std组（会含caspase-3和GSNO的肌原玻璃黏胶纤维棉）比较，caspase-3组中30 kDa TnT场面描写偏态曾加，得出结论caspase-3顺利通过了TnT的化学可生物吸附，于此，caspase-3与GSNO的孵育产生30 kDa TnT变低。在100和200 μM GSNO组当中沒有的检查测量到很大的性别差异(P > 0.05)，而当GSNO的酸度符合400 μM 时，该场面描写偏态缩减(P < 0.05)。这类发觉得出结论了SNO突显的caspase-3对TnT化学可生物吸附的改善效果。结核淀粉酶酶酶和TnT是caspase-3的敏锐底物，而GSNO治疗变低caspase-3的抗逆性可能会产生肌原玻璃黏胶纤维棉核淀粉酶酶酶化学可生物吸附成度变低。上述讲到阐明，NO诱骗的S-亚硝基化都可以顺利通过突显半胱氨酸残基来调caspase-3的抗逆性，借以更加骤后果其对结核淀粉酶酶酶和TnT的核淀粉酶酶酶溶解技能，关键在于后果鸡肉品性。

图6. S-亚硝基化caspase- 3化学降解肌钙蛋白质-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、工作小结

本探索主要是一起探讨S-亚硝基化对caspase-3呈现的从而导致到举例然后对鸡肉肌原玻璃氯纶体内吸附的从而导致到。核蛋白质质S-亚硝基化可呈现caspase-3的半胱氨酸残基，所以从而导致caspase-3灵活性下降，进三步阻止了其对鸡肉肌原玻璃氯纶核蛋白质质的核蛋白质质油脂水解的能力。

三、拜谱总结ppt

探析使用了酶活测试，亚硝基化绘制组学研究分析分析，WB等的检测策略，察觉到蛋清酶S-亚硝基化能够绘制caspase-3的半胱氨酸残基，这影响了caspase-3可溶性的调低，齐头并进一点抑制性了其对羊肉肌原弹性纤维蛋清酶的蛋清酶电离的能力。本探析为定义蛋清酶质亚硝基化对肉肥的干预新机制带来半个个新的视域。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的蛋清质组学、突显蛋清质组学、分解组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸类别厂品，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺碱化、total腐蚀保存、分离巯基，欢迎大家咨询！

借鉴论文：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663